放大字体  缩小字体 发布日期:2023-05-16
核心提示: 一、沉降菌检测标准操作规程 1 方法概述:本测试方法采用沉降法,即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培
 一、沉降菌检测标准操作规程

 

方法概述:

本测试方法采用沉降法,即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿,经若干时间,在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数,以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室(区)的洁净度。


所用的仪器和设备

2.1 高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。

2.2 恒温培养箱必须定期对培养箱的温度进行校验。

2.3 培养皿一般采用ф90mm×15mm 的硼硅酸玻璃培养皿。

2.4 普通肉汤琼脂培养基的准备及灭菌见附件a


测试步骤


3.1 采样方法

将已制备好的培养皿,按洁净室沉降菌采样点布置图的要求放置,打开培养皿盖,使培养基面暴露30分钟(静态),再将培养皿盖盖上后倒置。


3.2 培养

3.2.1 全部采样结束后,将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

3.2.2 在30℃-35℃培养箱中培养,时间不少于48h。

3.2.3 每批培养基应有对照试验,检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。


3.3 菌落计数

3.3.1 用肉眼直接计数,标记或在菌落计数器上点计,然后用5-10倍放大镜检查,看是否有遗漏。

3.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。


注意事项

4.1 测试用具要作灭菌处理,以确保测试的可靠性,准确性。

4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。

4.3 对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。

4.4 由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别,必要时用显微镜鉴别。

4.5 采样前仔细检查每个培养皿的质量,如发现变质,破损或污染的应剔除。


测试规则


5.1 沉降菌检测前,被检测洁净室(区)的温湿度须达到规定的要求,静压差、换气次数、空气流速控制在规定值内。

5.1.2 沉降菌检测前,被检测洁净室(区)已经过消毒。

5.1.3 测试状态有静态和动态两种,测试状态的选择必须符合生产的要求,并在报告中注明测试状态。


5.2 测试人员

5.2.1  测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。

5.2.2  静态测试时,室内测试人员不得多于二人。


5.3  测试时间

5.3.1 对单向流,测试应在净化空调系统运行不少于15min 后开始。

5.3.2 对非单向流,测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。


5.4 沉降菌计数

5.4.1  采样点数目及其布置

最少采样点数目如下表

面  

m2

洁 净 度 级 别

a

b

c

d

<10

≥10-<20

≥20-<50

≥50-<100

≥100-<200

2-3

5

8

16

50

2-3

5

8

16

50

2

2

2

5

10

2

2

2

2

3

注:表中的面积,对于单向流洁净室,是指送风面面积。对于非单向流洁净室是指房间的面积。

在满足最少测点数的同时,还宜满足最少培养皿数见下表

洁净度级别

所需ф90mm培养皿数(以沉降30分钟计)

a、b

c

d

14

2

2

采样点的布置

工作区采样点的位置离地0.8m-1.5m左右(略高于工作面)。     

可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。采样点位置的详细规则见附件b。

房间采样点超过10个点,每7天对所有采样点轮流监测一次。


5.5 记录

监测记录中应记录房间温度、相对湿度、测试状态。


5.6 结果计算

5.6.1  用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

5.6.2  平均菌落数的计算,见式(1)。

 


                       

式(1)

                              

式中:

m-平均菌落数;

m1-1号培养皿菌落数;

m2-2号培养皿菌落数;

mn-n号培养皿菌落数;

n-培养皿总数。

5.7 结果评定标准:

静态:

洁净度级别

微生物(沉降菌)最大允许数

洁净度级别

微生物(沉降菌)最大允许数

个/皿

个/皿

a、b级

0

d级

5

c级

3

   

注:表中各数值均为平均值。

5.7.1 洁净室(区)内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。

5.7.2 若某洁净室(区)内的平均菌落数超过评定标准,则必须对此区域先进行消毒,然后重新采样两次,测试结果均须合格。


附件

6.1 附件a:培养基的准备及灭菌

6.1.1 培养基的准备

培养基应购买国家认可的培养基。

6.1.2 培养基平皿的制备

6.1.2.1 将ф90mm 的培养皿置于121℃湿热灭菌20min或160℃干热灭菌2h。

6.1.2.2 将培养基加热熔化,冷至55℃时,在无菌操作要求下将培养基注入培养皿,每皿约15ml。

6.1.2.3 待琼脂凝固后,将培养基平皿倒置于30℃-35℃恒温培养箱中培养48h,若培养基平皿上确无菌落生长,即可供采样用。

6.1.2.4 注:制备好的培养基平皿宜在2℃-8℃的环境中存放。


6.2  附件b:采样点布置

洁净区采样点的布置力求均匀,避免采样点在某局部区域过于集中,某局部区域过于稀疏。

编辑:songjiajie2010

 
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关键词: 操作规程 监测
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