试验方法:以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物,穿刺接种并涂布于斜面,置36±1℃培养18~24h,观察结果。
三糖铁琼脂(tsi)成分:
蛋白胨 20.0g
牛肉膏 3.0g
乳 糖 10.0g
蔗 糖 10.0g
葡萄糖 1.0g
硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g
酚 红 0.025g或5g/l溶液5ml
氯化钠 5.0g
硫代硫酸钠 0.5g
琼 脂 12.0g
蒸馏水 1000.0ml
除酚红和琼脂外,将其他成分加入400ml蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至ph7.4±0.1。另将琼脂加入600ml蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min, 加热煮沸至完全溶解。
将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管(12mm×100mm),每管约2~4ml,高压灭菌121℃ 10 min或115℃15 min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。
原理分析:本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢(变黑)的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1,只能利用葡萄糖的细菌,葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍保持黄色。
而发酵乳糖的细菌(e.coli),则产生大量的酸,使整个培养基呈现黄色。
如培养基接种后产生黑色沉淀,是因为某些细菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氢,硫化氢和培养基中的铁盐反应,生成黑色的硫化亚铁沉淀。
提问:志贺氏菌都能分解葡萄糖,产酸不产气,大多不发酵乳糖,不产生h2s。应该产生什么现象?
大肠杆菌,能分解葡萄糖产酸产气,大多数能分解乳糖,不产生h2s。应该是什么现象?
沙门氏菌,能分解葡萄糖,不发酵乳糖,大多数产生h2s,多数产气。
下面照片所示2-3-4,可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌?
答案:2-志贺氏菌 3-沙门氏菌 4-大肠杆菌