【文章来源】药物微生物检验公众号
药品中的成分复杂，包括有效成分、辅料（淀粉、糊精、色素等），这些成分当中的有机物很容易遭受微生物污染。在药品生产过程中，微生物检测是评价产品质量和安全性的重要指标之一。在微生物检测的过程中，菌种保藏是一项重要的基础性工作。使用正确的方法对菌种进行保藏可以有效地避免菌种的死亡、退化和污染，便于生产及科学研究。国家也颁布了相应的法规和标准。
一、菌种的复苏
1.制备菌悬液母液：根据微生物的种类，向冻干菌种管中加入适量适合微生物生长的培养液（如表1.1[1] 注意是液体培养基），混合均匀。
表1.1 不同菌种适用的液体培养基
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菌株种类 |
培养液 |
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细菌 |
营养肉汤 |
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白色念珠菌 |
沙堡液体培养基 |
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分枝杆菌 |
苏通综合液体培养基 |
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黑曲霉菌 |
麦芽浸膏营养肉汤培养基 |
2.将菌悬液按照合适的比例加入到含有培养液的试管中，根据微生物的种类确定培养温度和培养时间（表1.2）[1]，进行菌种复苏。培养后的微生物为第1代培养物。
表1.2 不同菌种的培养温度和培养时间
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菌株种类 |
培养温度 |
培养时间 |
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一般菌种 |
36 ℃±1 ℃ |
18 h～24 h |
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黑曲霉菌 |
30 ℃±1 ℃ |
42 h～48 h |
二、菌种传代
1.根据菌株种类选择合适的固体平皿培养板（如表2.1[1]注意是固体培养基），取第1代培养物进行划线接种，并在适宜温度和培养时间下培养。平皿上长出的菌落为第2代培养物。
表2.1 不同菌种适用的固体培养基
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菌株种类 |
培养液 |
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细菌 |
营养琼脂培养基 |
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白色念珠菌 |
营养琼脂培养基 |
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分枝杆菌 |
改良罗氏培养基或其他商品化分枝杆菌专用复合琼脂培养基 |
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黑曲霉菌 |
麦芽浸膏琼脂培养基 |
2.在含有第2代培养物的平皿上挑取典型菌落，接种到相应的培养基平皿或斜面上，在适宜温度和培养时间下培养（表2.2）[1]，记为第3代培养物。
表2.2 不同菌种的培养温度和培养时间
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菌株种类 |
培养温度 |
培养时间 |
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一般菌种 |
36 ℃±1 ℃ |
18 h～24 h |
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分枝杆菌 |
36 ℃± 1℃ |
72 h |
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黑曲霉菌 |
30 ℃±1 ℃ |
42 h～48 h |
3.按照上述方法将菌种培养至所需代数即可。
三、流程示意图
四、操作要点
1.选择合适的培养基很重要。
2.全程无菌操作，避免污染。
3.培养时间不要过长。
4.信息标注很重要（菌种名称、菌种号、代数、传代日期等）。
五、参考文献
[1]wst683-2020 消毒试验用微生物要求
具体的操作细节依据标准即可，小编就不赘述了。需要ws/t 683电子版的小伙伴记得关注公众号后，加小编微信好友领取哦！
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