我们都知道,微生物无处不在,而且微生物个体十分小,肉眼无法直接进行观察,必须要借助显微镜进行观察,一些不易观察的菌还需要借助染色之后才能清楚看到。
今天我们就来探讨一下
cfu到底是什么?
菌落总数往往采用的是平板计数法,经过培养后数出平板上所生长出的菌落个数,从而计算出每毫升或每克待检样品中可以培养出多少个菌落,于是以cfu/ml或cfu/g报告。
part.01定义
我们先来看看cfu的国际定义。
cfu:acolony-forming unit(cfu,cfu,cfu)is a unit used in microbiology to estimate the number of viable bacteria or fungal cells in a sample.(菌落形成单位是指微生物学中用于估算样品中活的细菌或者真菌数量的单位。)
具体来说,cfu就是在活菌培养计数时,由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落,指的是单位体积中的细菌、霉菌、酵母等微生物的群落总数。
cfu是形成菌落的菌落个数,不等于细菌个数。(比如两个相同的细菌靠得很近或贴在一起,那么经过培养这两个细菌将会形成一个菌落,此时就是2个细菌,1cfu)。
part.02cfu计数的要求
理论上,一个活细菌可以在条件合适的固体表面上形成一个菌落,但是吸附于微小颗粒上的两个以上菌体或粘连在一起的菌团可能共同形成一个菌落,而且不同环境因素作用下,细菌的生活能力各不相同,会影响其在该条件下形成菌落的能力,致使形成的菌落数远低于实际的活菌数。
这种方式得出的数据并不能直接等于样品中的微生物数量,而是一种认可的估算,这就要求操作者在进行涂布平板或者接种之前把微生物活菌进行充分的均匀分散。但是一些链球菌、球菌等天生就不能单细胞分散均匀。
另外,考虑到各类样品的微生物含量不一,为使cfu区间按照国标计算方法有效落在30-300之间,必须要保证合理的稀释倍数,过多或者过少都不合适。
part.03 cfu是一种估算方法
使用菌落形成单位进行计数与一般的计数方式不同,一般在显微镜下计算细菌数量,会将活菌与死菌都计入其中,但是cfu计数只有是活菌才能在平板上生长形成菌落,因此只计算活菌数量。理论上只要分散足够均匀,一个活细胞形成一个cfu,但是实验中为了分散细菌,经常会导致细菌死亡,从而无法生长成单菌落。
同时,微生物最终能否在平板上生长成一个菌落,还和培养基本身、培养时的条件、微生物自身的状态等各种各样的因素有关。这就注定了cfu不能是一种精确计数的计量方式。
总之,cfu是一种估算方法,选择cfu进行计量表示时,就代表使用者已认同它的不精确性,需要接受这种测量方式的误差。最后举例来说,若定量菌种的菌种数量标示的是“cfu”,代表是用培养基法来计数的。若定量菌种是用流式细胞仪等其他方式计数,标示“个”更为合理。
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